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Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒

產(chǎn)品描述
本鈣黃綠素AM/碘化丙啶雙染試劑盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit)，包含鈣黃綠素AM和碘化丙啶兩種熒光染料，用于對活細(xì)胞和死細(xì)胞的同時(shí)染色，即是常稱的活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒（Live/Dead Cell Double Staining Kit）。
試劑盒工作原理在于：Calcein AM（鈣黃綠素乙酰甲酯），CAS 48504-34-1，一種具高度親脂性和細(xì)胞膜滲透性的活細(xì)胞熒光染料。本身不具熒光，一旦進(jìn)入細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解生成鈣黃綠素（calcein），產(chǎn)生亮綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。因此，Calcein AM僅對活細(xì)胞進(jìn)行染色。另一方面，碘化丙啶（PI），一種細(xì)胞核染料，不能穿透完整的活細(xì)胞膜。只能穿透死細(xì)胞的不規(guī)則區(qū)域進(jìn)入細(xì)胞核，然后嵌入DNA雙螺旋區(qū)域，產(chǎn)生紅色熒光（Ex/Em= 535nm/617nm）。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。結(jié)合這些特點(diǎn)，Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用作活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。

產(chǎn)品組成

注意事項(xiàng)
1）由于Calcein-AM對濕度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量，分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作時(shí)一定要注意防護(hù)。若接觸到皮膚，需要立即用自來水清洗。
3）為了您的an全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、試劑準(zhǔn)備
1.1 1×反應(yīng)緩沖液（Assay Buffer）的配制
從低溫冰箱內(nèi)取出10×Assay Buffer，根據(jù)單次用量無菌條件取出適量，用去離子水（dH2O）做10倍稀釋以得到1×Assay Buffer。
1.2    1×染色工作液（Stain Buffer）的配制
1）   先將低溫保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液（1.5 mM）室溫回溫至少20min，使其充分融化。【注意：*次使用時(shí)建議對儲(chǔ)存液根據(jù)單次用量分裝，特別是Calcein AM，以減少反復(fù)凍融次數(shù)?！?br/>二、染色步驟
常見問題
1、該試劑盒適用任何細(xì)胞類型？
基本上適用于任何含酯酶活性的動(dòng)物細(xì)胞。植物和xi菌細(xì)胞因含有細(xì)胞壁，Calcein-AM不能進(jìn)入因此無法染色。有可能對原生質(zhì)體進(jìn)行染色。
2、用相同濃度有可能對所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行染色？
對所有細(xì)胞都用相同的濃度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作濃度根據(jù)細(xì)胞類型差異很大。有必要根據(jù)具體細(xì)胞來確定zui價(jià)染料濃度。參考說明書染料工作濃度優(yōu)化方法。
3、Calcein-AM對細(xì)胞有毒？
與其他相似的活細(xì)胞染料比較，Calcein-AM基本無毒（毒性zui小）。見文獻(xiàn)EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 試劑盒如何保存？
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮會(huì)水解，因此直至管子溫度達(dá)到室溫后才能開蓋。使用后擰緊蓋子。用緩沖液或者培養(yǎng)基稀釋后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。

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